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【ppt】酶免疫技术
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  • 上传日期:2017-04-18 21:08
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资源简介

【ppt】酶免疫技术
酶免疫技术
Enzyme Immunoassay

免疫标记技术是用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂等作为追踪物,标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应

荧光显微镜,射线测量仪,酶标检测仪,电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器,对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定

敏感性、特异性、精确性及应用范围


免疫荧光技术
放射免疫技术
免疫酶技术
免疫电镜技术
免疫胶体金技术
发光免疫测定


酶免疫技术 Enzyme Immunoassay(EIA)
抗原抗体反应+酶催化反应
肉眼、光学显微镜、电子显微镜、分光光度计
特异、敏感
可以在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位,或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。


(一)基本原理
酶标记抗体或抗原:
抗体或抗原的免疫学反应特异性 + 酶活性

酶是一种有机催化剂:
使底物基质水解而呈色
使供氢体由无色还原型变为有色氧化型
∴ 可用呈色反应显示酶的存在。

  很少量的酶即可导致大量的催化过程,所以极为敏感。

(二)常用的酶及其底物
酶活性高;具有抗原抗体共价结合的基团;标记后不影响酶活性及抗原、抗体反应性;产物易判定或测定;酶活性不受样品中其他成分的影响(用于均相测定的酶标抗原与抗体结合后酶活性出现抑制或激活);无害;稳定,价廉、易得。

常用酶 底物 显色 辣根过氧化物酶 邻苯二胺、H2O2 橙黄色
四甲基联苯胺、 H2O2 蓝色 碱性磷酸酶 对硝基本磷酸脂 黄色
(三)标记方法
酶结合物

技术简单、产率高;不影响酶和抗体(抗原)的生物活性;所得酶标记物稳定;较少形成酶与酶、抗体与抗体、抗原与抗原的聚合物。

戊二醛交联法:抗原-戊二醛-酶

改良过碘酸钠标记法:过碘酸钠氧化酶的羟基为醛基,再与抗体蛋白的氨基结合。HRP-CH2-NH-IgG

(四)酶标记物的纯化及鉴定
1、纯化
游离酶:增加非特异染色
游离抗原(抗体):竞争降低特异性染色

葡聚糖凝胶层析法
50%饱和硫酸铵沉淀提纯法

2、鉴定

免疫活性鉴定:免疫电泳/双扩/ELISA

酶标记率测定:分光光度法
(五)固相酶免疫测定仪(酶标仪)
比色
测定波长、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制、定性和定量的软件,自动洗板、温育、加样
450nm、492nm、620nm、630nm、650nm、405nm



(六)类型

酶免疫组织化学技术:检测组织或细胞中抗原或抗体
酶免疫测定:用酶标记抗原或抗体做标记物,检测液体样品中可溶性抗原或抗体含量的微量分析技术。
根据抗原抗体反应后是否需将结合和游离的酶标记物分离,分为均相和异相
均相:酶标抗原+非标记抗原+限量抗体,酶标记物发生抗原抗体反应后,酶活性减弱或增强。
异相:反应后,分离形成复合物的酶标记物并检测。根据是否采用固相材料以吸附抗原或抗体分为液相和固相。
液相:待测抗原+酶标抗原+抗体,一次性温育
待测抗原+抗体,温育,加酶标抗原,温育
固相:固相预先吸附抗原或抗体,在其表面反应
【ppt】酶免疫技术

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西医研究文章,不错

回复(0)发表于2017-04-22 07:46:08